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辣木葉乙醇提取物對非酒精性脂肪肝小鼠模型血脂和氧化應激影響的研究

發布時間:2019-11-07 09:30所屬分類:預防醫學瀏覽:1加入收藏

摘 要: 該研究以低劑量(5 mgkg-1)、中劑量(30 mgkg-1)和高劑量(60 mgkg-1)的辣木葉乙醇提取物(EE-MO)干預高脂飲食誘導的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠動物模型。結果

  摘 要: 該研究以低劑量(5 mg·kg-1)、中劑量(30 mg·kg-1)和高劑量(60 mg·kg-1)的辣木葉乙醇提取物(EE-MO)干預高脂飲食誘導的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠動物模型。結果表明:(1)高劑量的EE-MO顯著降低NAFLD小鼠的體重和肝濕重;EE-MO劑量依賴性地降低NAFLD小鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量;高劑量的EE-MO除降低上述生化指標外,還顯著降低血清中FFA含量。(2)HE和蘇丹紅Ⅲ染色發現,EE-MO處理后,模型組小鼠的肝脂肪病變和細胞損傷得到顯著改善。(3)EE-MO對NAFLD小鼠模型的血脂代謝具有改善作用。(4)高脂飲食誘導小鼠肝臟和血清的ROS和MDA的含量,誘導SOD、POD和CAT活性增加,降低GSH-Px活性。(5)低劑量、中劑量和高劑量的EE-MO依賴性地降低NAFLD小鼠肝臟和血清的ROS和MDA的含量,緩解氧化脅迫。(6)低劑量的EE-MO對SOD、POD、CAT和GSH-Px酶活性無顯著影響;中劑量和高劑量的EE-MO處理后,NAFLD小鼠的SOD、POD和CAT酶活性顯著下降,GSH-Px活性顯著增加;EE-MO可能通過GSH-Px抗氧化酶途徑緩解NAFLD小鼠的氧化脅迫。

  關鍵詞: 辣木, 氧化應急, 非酒精性脂肪肝, 血脂

植物論文投稿

  《煙臺果樹》(季刊)創刊于1980年,由煙臺市農科院果樹科學研究所主辦。《煙臺果樹》發行量大(年發行16萬冊),覆蓋面廣,讀者遍及全國各地。

  辣木(Moringa oleifera)為辣木科辣木屬植物,有“奇跡之樹”的美稱,是一種有獨特經濟價值的熱帶植物。辣木原產于印度,從20世紀開始,我國的云南、廣東、廣西、福建、貴州、臺灣等省(區)開展了辣木引種種植和產業化開發研究。辣木渾身是寶,根皮是傳統醫藥原料,嫩葉和嫩果是味道和營養都豐富的蔬菜,種子富含植物油,在國際市場上十分緊俏。

  據測定,辣木的蛋白質含量為牛奶的2倍、鈣為牛奶的4倍、鉀為香蕉的2倍、鐵為波菜的2倍、維生素C為柑桔的7倍、維生素A為胡蘿卜的4倍、維生素E分別是螺旋藻和黃豆粉的70倍和40倍(劉昌芬和李國華,2004)。現代藥理學的研究表明,辣木有退熱、消炎、排石、利尿、降壓、降血脂和抗氧化等功效。在印度和非洲國家辣木常用于治療糖尿病、高血壓、心血管病和肥胖癥等(Anwar et al., 2007; Fahey, 2005; Ghasi et al., 2000;Song et al.,2017)。楊倩等(2017)發現,不同劑量的辣木水提取物能降低高脂膳食誘導的肥胖大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量。正常的SD大鼠喂食辣木葉粉后,血清中甘油三酯和膽固醇含量顯著低于對照組(張幸怡等,2016)。

  此外,辣木提取物還具有較好的抗氧化作用。體外研究發現,辣木葉乙醇提取物(ethanol extract of Moringa oleifera, EE-MO)對DPPH、ABTS和OH自由基的清除率與正對照BHT相似(周偉等,2017)。辣木莖葉中的水溶性多糖對羥自由基及超氧陰離子均有清除作用,且具有劑量依賴性(梁鵬和甄潤英,2013)。在大鼠腎和心肌缺血再灌注模型中,辣木籽提取物能顯著降低模型組動物血清的MDA含量,增加血清及腎或心臟中谷胱甘肽過氧化物酶活性,緩解氧化脅迫(曲震理, 2016; 曲震理等, 2017)。

  非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的進展是一個緩慢的過程,包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪性肝纖維化和肝硬化,部分患者甚至可進展為肝細胞癌。近年來,隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,我國的NAFLD發病率明顯上升且呈年輕化趨勢,現在NAFLD已經成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。 NAFLD的發病機制尚未完全明確,目前認為主要與胰島素抵抗(IR)、氧化應激、炎癥作用、庫普弗細胞與細胞因子、脂代謝紊亂和鐵超載等相關(Loomba & Sanyala,2013)。其中,氧化應激和脂代謝紊亂在NAFLD肝細胞損傷過程中具有十分重要的作用。本文主要研究EE-MO對NAFLD小鼠模型血脂和氧化應激的影響,探索EE-MO在改善NAFLD癥狀方面的有效性,并揭示可能的機理,為辣木的進一步合理開發提供依據和參考。

  1 材料與方法

  1.1 EE-MO的制備

  辣木葉購于云南省昆明市螺螄灣藥材市場。稱取2.5 kg干燥的辣木葉,粉碎后,加95%乙醇室溫提取3次(每次為6 L,24 h)。合并提取液后,用旋轉蒸發儀回收乙醇至無醇味。醇提物用冷凍干燥機進行冷凍干燥,得到干燥粉末狀的醇提物。

  1.2 動物實驗和分組

  共有55只SPF級小鼠,隨機選取10只為正常對照組 (N-CK),其余45只為模型組。參考鐘嵐等(2000)的方法復制脂肪肝大鼠模型,用88%普通飼料、10%豬油、2%膽固醇制成的混合飼料,經機器生產壓制成條狀,制成高脂飼料。正常組始終喂以普通飼料,模型組喂以高脂肪飼料。模型組從第5周開始從背部后側注射40%的CCl4豆油溶液,正常組注射純豆油溶液,注射劑量為2 μL·g-1,每周2次,共3周。

  造模8周后,隨機選擇5只模型組小鼠處死,取出肝臟做病理切片,檢查模型是否復制成功,確定成功后,從第8周開始,將模型組分為模型對照組(M-CK)、低劑量辣木葉處理組(D-LM)、中劑量辣木葉處理組(Z-LM)和高劑量辣木葉處理組(G-LM)。每天早上9:00,D-LM、Z-LM和G-LM處理組小鼠分別用5、30和60 mg·kg-1的辣木葉提取物灌胃,M-CK處理組給予等體積的生理鹽水灌胃。處理期間,N-CK組小鼠繼續用普通飼料喂養,所有模型組的小鼠用高脂飼料喂養。持續2周后,將所有小鼠處死,取其血液和肝臟組織,做后續生化指標和病理學檢測。

  1.3 血液和肝組織生理生化指標檢測

  TC、TG、HDL-C、LDL-C和FFA含量與ALT和AST活性均采用試劑盒測定。所有操作按照試劑盒說明進行。其中,TC和TG含量所用試劑盒購于上海生物工程技術有限公司。HDL-C、LDL-C和FFA含量所用試劑盒購于大連TAKARA公司。ALT和AST活性測定所用試劑盒購于中國上海西格瑪奧德里奇貿易有限公司。

  1.4 抗氧化物酶活性測定

  用氮藍四唑法測定SOD酶活性,用愈創木酚法測定POD酶活性,用紫外速率法測定CAT酶活性,用分光光度計比色法測定GSH-Px活性。

  1.5 MDA和ROS含量測定

  脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸分光光度法測定,ROS含量采用Luminol化學發光法測定(Faulkner & Fridovich,1993)。

  1.6 HE染色

  將肝臟組織碎片放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液浸泡固定24 h,取出,用自來水沖洗4 h后,依次用50%、70%、80%、90%和100%乙醇浸泡脫水。將脫水后的標本用二甲苯浸泡2次(每次15 min)。用石蠟包埋后,進行切片。切片先依次放入二甲苯I和II進行浸泡脫蠟,然后用95%、85%、70%和50%的梯度酒精溶液中依次浸泡2 min蒸餾水沖洗2 min。標本經蘇木素浸染5~15 min和1%伊紅水浸染1~5 min,脫水,透明后進行鏡檢。

  1.7 蘇丹紅Ⅲ染色

  參照馬羽萍等(2010)的方法。

  2 結果與分析

  2.1 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型體重和肝濕重的影響

  如表1所示,高脂飲食8周后,M-CK組小鼠的體重顯著高于N-CK組。用低劑量的EE-MO干預2周后,小鼠體重與M-CK組相比無顯著性差異。用中、 高劑量的EE-MO干預2周后, 小鼠的體重與M-CK組相比有下降的趨勢,雖然Z-LM組小鼠的體重與M-CK組相比仍無顯著性差異,但G-LM組小鼠體重顯著低于M-CK組。肝濕重與體重的變化趨勢類似,M-CK組小鼠的肝濕重顯著高于N-CK組。用EE-MO干預2周后,D-LM和Z-LM組與M-CK組小鼠肝濕重無顯著性差異,而G-LM組肝濕重顯著低于M-CK組。

  2.2 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型肝TC、TG、HDL-C、LDL-C及FFA含量的影響

  如圖1:A所示,高脂飲食8周后,M-CK組小鼠血清的TC和TG含量均顯著高于N-CK組。EE-MO能夠劑量依賴性降低模型組小鼠血清TC和TG的含量。血清LDL-C和HDL-C含量的變化趨勢與TC和TG含量變化趨勢類似。M-CK組小鼠血清的LDL-C和HDL-C含量均顯著高于N-CK組,用EE-MO處理后,NAFLD小鼠模型的LDL-C和HDL-C含量均顯著降低 (圖1:B)。高脂飲食后,M-CK組血清的FFA含量顯著高于N-CK。用不同劑量提取物處理后,D-LM和Z-LM組的血清FFA含量與M-CK組無顯著性差異,而G-LM組顯著低于M-CK組 (圖1:C)。

  2.3 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型血清ALT和AST活性的影響

  如圖2所示,NAFLD小鼠模型血清ALT和AST的變化趨勢類似,高脂飲食誘導血清ALT和AST活性均顯著增加。EE-MO處理后,NAFLD小鼠模型的ALT和AST活性顯著下降,且具有劑量依賴性,即血清ALT和AST的活性大小順序為D-LM>Z-LM>G-LM。


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